SHIV KU-1靜脈途徑感染恒河猴模型

1.該模型制備比較成熟，國內外都有此模型，構建和評價指標一致，所以該模型應用廣泛，具有統一的操作規程。

2. 該模型制備的關鍵：1）小鼠必須是重度免疫缺陷的，而且飼養環境必須潔凈；2）HIV操作需要生物安全。

3.此模型具有完善的人的免疫系統，HIV感染后，具有艾滋病病人相似的臨床癥狀，所以具有很高的比較醫學應用價值。

1、 臨床癥狀

G1301V在長期感染過程中，健康狀況良好，無典型感染癥狀。G1302V在感染前期狀態良好，但自感染350d后精神逐漸萎靡，長期慢性腹瀉，于感染后457d死亡。

2、 SHIVKU-1靜脈感染恒河猴外周血病毒載量結果

兩只實驗猴（G1301V和G1302V）都在感染后第4d就檢出了血漿病毒載量，其后一直在1.0×104 copies/mL左右波動，沒有出現明顯的載量高峰（圖1）。

圖1 SHIV KU-1靜脈感染中國恒河猴外周血病毒載量結果

Fig.1 Theviremia (viral RNA copies/ml plasma) in Chinese-original rhesus macaquesinfected intravenously with SHIV KU-1

1、 SHIV KU-1靜脈感染恒河猴CD4+/CD8+比值結果

感染后外周血中CD4+/CD8+都有一個明顯下降過程（圖2）。G1301V在感染后的3w內從感染前的1.96下降到0.50，短暫徘徊后持續上揚，至3個月，已基本恢復至初始水平，達到1.53；G1302V感染前1.21，感染后3w降至0.1，其后穩定在0.2左右，至感染后400d下降接近0。

圖2 SHIV KU-1靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+/CD8+T淋巴細胞比值

Fig.2 The changes of CD4+/CD8+ ratio of T lymphocytesin Chinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1

SHIVKU-1靜脈感染恒河猴CD4+細胞絕對數結果

兩只猴G1301V和G1302V在CD4+T細胞絕對數上變化基本相同（圖3）。感染后外周血CD4+T細胞數迅速下降，3w后分別從感染前990個/mL、1300個/mL下降到最低點420個/mL和76個/mL，其后基本保持水平，3個月時為590個/mL和180個/mL。G1302V在感染后期一直維持在100個/mL以下。

圖3 SHIV KU-1靜脈感染中國恒河猴外周血CD4+T淋巴細胞絕對數

Fig.3 The CD4+ T cell counts (per l blood) inChinese-original rhesus macaques infected intravenously with SHIV KU-1

1、 實驗用病毒：感染毒株為SHIV KU-1中國恒河猴細胞適應株，中國恒河猴PBMCs滴定TCID50滴度為103.75 TCID50/mL。

2、 感染動物：選用體重4-6kg的SPF恒河猴。實驗前體檢無異常，必須排除猴免疫缺陷病毒(SIV)、猴逆轉錄D型病毒(SRV-1，2，5)和猴T淋巴細胞性I型病毒(STLV-1)的感染。猴免疫缺陷病毒（SIV）易感性密切相關的4種基因（Mamu-A*01、Mamu-A*02、Mamu-B*08、Mamu-B*17）篩查結果為陰性。所有感染動物必須在ABSL-3室中進行。

3、 感染方法：用0.4ml SHIV KU-1病毒原液經后肢靜脈接種恒河猴。

4、 SHIVKU-1靜脈感染猴樣品采集和指標測定：感染前和感染后按指定時間點采集EDTA抗凝血4mL，分別測定血常規、血漿病毒載量、CD4+/CD8+、CD4+細胞絕對數。

5、 SHIVKU-1靜脈感染猴血漿病毒載量的測定：提取EDTA抗凝血漿中病毒RNA，使用SYBR Green I 實時熒光定量RT-PCR方法測定血漿病毒載量。

6、 SHIVKU-1靜脈感染猴外周血CD4+/CD8+比值及絕對數測定：CD3-PerCP、CD4-FITC、CD8-PE抗體標記EDTA抗凝全血淋巴細胞，流式細胞儀測定CD4+/CD8+比值，并根據血常規結果，計算出CD4+T細胞絕對數。

一、 艾滋病概述

艾滋病(Acquired ImmunodeficiencySyndrome, AIDS)，是由人免疫缺陷病毒（Human Immunodeficiency Virus, HIV）引起，以全身免疫系統嚴重損害為特征的傳染性疾病，是20世紀危害人類健康和生命最嚴重的病毒性疾病之一。自美國CDC報道首例艾滋病后，到20世紀80年代中期艾滋病發展成為一個性的流行病。截止2014年底，HIV已感染3690萬人，2014年新增感染者200萬，2014年因艾滋病死亡120萬人。艾滋病在1985年傳入我國，截至2015年5月31日，歷年累計報告艾滋病530628例，其中艾滋病病人217457例，死亡167159例。艾滋病早已成為關注的公共衛生和社會熱點問題，艾滋病的預防與治療也成為當代生物醫學研究的前沿熱點之一。

二、艾滋病動物模型簡介

艾滋病發病機制研究、藥物和疫苗的保護性研究及評價等方面在很大程度上依賴理想的動物模型。SIV/SAIDS(猴艾滋病)模型被廣泛接受和應用，表現為和AIDS的臨床表征，發病過程、免疫缺陷特征等非常相似。然而，由于HIV與SIV畢竟是兩種不同的病毒，它們在基因序列、包膜結構和抗原性之間存在一定差異，使該模型的使用有一定的局限性。近年來，人們應用分子生物學技術，將HIV-1重要基因與SIV做成嵌合體病毒（SIV/HIV-1，簡稱為SHIV）感染恒河猴，用以研究HIV不同基因的功能以及病毒與宿主的相互作用。

SHIVKU-1是SHIV-HXBc2經恒河猴和豬尾猴系列傳代得到的一株SHIV強毒株，它具有CXCR4嗜性，能在短期內引起感染猴外周血CD4+T細胞的耗竭，繼而導致實驗猴發病甚至死亡。

艾滋病的三種傳播途徑分別是經血液、性和母嬰傳播，性傳播包括同性傳播和異性傳播兩種方式。艾滋病動物模型的制備首先要考慮其實際應用價值，最好的動物模型可以最大限度的模擬人類疾病，包括使用與自然感染相同或接近的方式建立模型。為充分模擬靜脈注射吸毒人群的感染方式，通過靜脈途徑，病毒直接感染血液中的靶細胞，從而制備靜脈途徑艾滋病恒河猴感染模型。