條件性ZIKV-NS2A過表達小鼠模型

１. 病毒滴度的變化：接種病毒后，動物肺組織PVM?RT-PCR檢測可檢出病毒，病毒滴度在感染后３天達到高峰，并可維持至７日，隨后滴度下降。

２. 感染動物體重較之未感染動物體重下降，動物多出現豎毛，弓背等癥狀。嚴重者體重下降，行動出現遲緩，耳及尾可見紫紺，震顫，處于瀕死狀態。用于藥效評價實驗時，應控制感染劑量，降低因感染出現的急性死亡（４日內）。６~７日的死亡率可作為藥效評價的指標。

３. 病理損傷以充血、出血、肺組織水腫以及炎細胞浸潤為標準，應測定肺間隔，以及肺通氣水平，進而評估肺呼吸能力。

４. 炎癥因子重點關注IL-1β，IL-6，IL-18，MCP-1，IFN-γ等。

進行人類RSV 肺炎感染研究，國內外推薦使用PVM做替代實驗。PVM的毒株不同，實驗動物的品系不同，動物的臨床表型也會存在差異。本模型的表型與國外進行的模型研究表型相似，在急性期的死亡率較低，有較長的臨床治療的窗口，可用于免疫治療的療效評價。

PVM為低于人間傳染病名錄三級安全風險的病原，人類感染的風險低，但不排除對免疫功能缺陷者的致病性。

PVM是嚙齒類實驗動物必須排除的病原體，對動物有致病性。會干擾其他實驗研究。

鑒于此，此感染實驗必須在BSL-2級以上的生物安全實驗室進行病原學實驗，在ABSL-2實驗室進行動物實驗。

ZIKV NS2A在招募病毒RNA、結構蛋白prM/E和病毒NS2B/NS3蛋白酶到病毒粒子組裝位點并協調病毒粒子形態形成方面發揮了核心作用，是寨卡病毒粒子組裝的重要功能分子。

F0代構建：

寨卡病毒（ZIKV）屬于屬黃病毒科黃病毒屬，病毒顆粒呈球形，直徑40-70nm。孕婦感染可導致ZIKA綜合征，造成新生兒的小頭畸形；成人感染還可導致格林-巴利綜合征。寨卡病毒是單股正鏈RNA病毒，基因組長約10.8kb，含一條單一開放讀碼框。病毒蛋白由一個單一的多蛋白前體，經宿主蛋白酶和病毒蛋白酶切而成，包括3個結構蛋白（C、prM/M、E）和7個非結構蛋白（NS1、NS2A、NS2B、NS3、NS4A、NS4B、NS5）。非結構蛋白具有絲氨酸蛋白么、RNA解旋酶和RNA依賴RNA聚合酶功能。寨卡病毒主要通過病毒感染的伊蚊類蚊媒叮咬傳播；亦可通過母嬰傳播，包括宮內感染和分娩時感染；也可通過輸血和性傳播。寨卡病毒感染的潛伏期數日至一周，約20%感染者出現臨床癥狀，典型病癥表現為：急性發熱伴斑丘疹、關節痛或結膜炎、肌痛和頭痛。臨床表現一般較輕，持續數天至一周，重癥病例少見，病死率極低。但是孕婦在妊娠期感染寨卡病毒可能會引起胎兒先天性小頭畸形或胎死宮內。寨卡病毒粒子組裝的分子機制在很大程度上是未知的。有研究表明，ZIKV NS2A在招募病毒RNA、結構蛋白prM/E和病毒NS2B/NS3蛋白酶到病毒粒子組裝位點并協調病毒粒子形態形成方面發揮了核心作用。一種破壞這些相互作用的突變不會顯著影響病毒RNA復制，但會選擇性地破壞病毒粒子的組裝，表明了這些相互作用在病毒形態發生中的特定作用。研究還發現，ZIKV RNA的3'UTR可能作為一種“招募信號”，通過與NS2A結合進入病毒粒子的組裝位點。在病毒粒子組裝位點C-prM-E協調切割后，NS2A可能將病毒RNA呈遞給C蛋白形成核衣殼，然后被prM/E蛋白包膜。