肌苷致急性高尿酸血癥大鼠模型

該模型通過(guò)長(zhǎng)期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時(shí)，檢測(cè)其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來(lái)確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國(guó)際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機(jī)制提供了工具。

模型動(dòng)物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動(dòng)物房SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點(diǎn)

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時(shí)針走向設(shè)計(jì)。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機(jī)房和配電室等。

（2）設(shè)計(jì)參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對(duì)濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強(qiáng)梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級(jí)；菌落數(shù)：≤3個(gè)/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動(dòng)物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時(shí)間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過(guò)初、中、三級(jí)過(guò)濾器后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動(dòng)物飼養(yǎng)室、實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實(shí)驗(yàn)室等安裝有手動(dòng)和自動(dòng)開關(guān)，根據(jù)實(shí)際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點(diǎn)和晚上8點(diǎn)開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因?yàn)镾PF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機(jī)，按照房間順序編排電話號(hào)碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機(jī)保持聯(lián)系，保證實(shí)驗(yàn)室內(nèi)外信息的及時(shí)溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室的出入口、走道、實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機(jī)，能夠及時(shí)了解設(shè)施的運(yùn)行狀態(tài)；也能有效督促實(shí)驗(yàn)人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對(duì)整個(gè)實(shí)驗(yàn)期間的動(dòng)物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對(duì)動(dòng)物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級(jí)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物飲用水以純凈水為宜。本實(shí)驗(yàn)室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報(bào)系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時(shí)發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動(dòng)物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對(duì)SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室使用獨(dú)立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機(jī)房控制室安裝風(fēng)機(jī)故障警報(bào)系統(tǒng)，以便及時(shí)檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運(yùn)行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級(jí)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)室時(shí)所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動(dòng)物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C(jī)動(dòng)門真空滅菌器消毒。

（10）動(dòng)物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點(diǎn)。通用的不銹鋼籠具長(zhǎng)、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，配有底盤和食槽，確保實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有充足的采食和活動(dòng)空間，同時(shí)也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時(shí)，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長(zhǎng)發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國(guó)家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測(cè)一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營(yíng)養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

1. 血清尿酸水平變化

實(shí)驗(yàn)組血清尿酸值升高（圖1、表1）。

1. 誘導(dǎo)劑準(zhǔn)備

肌苷溶于生理鹽水。

2. 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

SPF級(jí)Wistar 大鼠，240-260g。

3. 給藥

造模組和生理鹽水對(duì)照組。造模組腹腔給與不同劑量的肌苷溶液造模。劑量組的肌苷劑量分別為：50mg/kg、100mg/kg、150mg/kg、200mg/kg、300mg/kg、400mg/kg。

4. 模型分析指標(biāo)

（1） 尿酸水平檢測(cè)

給藥后0.5h、 1h、2h、4h、8h 空腹割尾采血0.4ml于 1.5ml EP 管中，置于4℃ 冰箱放置1h，4℃ 、13 000r/min 離心15min，取血清，磷鎢酸法測(cè)定尿酸值。

高尿酸血癥是由各種因素引起的尿酸產(chǎn)生過(guò)多、或腎臟排出尿酸減少、或兩者兼有，致使血液中尿酸鹽超過(guò)正常水平（6 毫克/100 毫升）的病理狀態(tài)。高尿酸血癥是痛風(fēng)最重要的生化基礎(chǔ)，并且與心血管疾病、免疫系統(tǒng)紊亂等密切相關(guān)，嚴(yán)重危害人類健康。目前臨床上用于治療高尿酸血癥的藥物以抑制尿酸生成和促進(jìn)尿酸排泄為主。隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展和人們對(duì)高尿酸血癥發(fā)病機(jī)制和遺傳學(xué)認(rèn)識(shí)的日益加深，新的治療靶點(diǎn)不斷被發(fā)現(xiàn)，新型治療藥物也相繼問(wèn)世。尋找更加合理、科學(xué)的藥效學(xué)評(píng)價(jià)動(dòng)物模型迫在眉睫。

以美國(guó)Biocryst公司研發(fā)的新型降血尿酸藥物Ulodesine為例，其降尿酸機(jī)制主要通過(guò)抑制嘌呤核甘磷酸酶（PNP）活性，進(jìn)而減少次黃嘌呤及黃嘌呤在體內(nèi)的積累，以達(dá)到降低血尿酸的目的。隨著該藥二期臨床終點(diǎn)的到達(dá)，PNP靶點(diǎn)得到了廣泛關(guān)注。現(xiàn)有的抑制尿酸生成的市售藥物均以黃嘌呤氧化酶（XO）為治療靶點(diǎn)，而從尿酸生成途徑來(lái)看，肌苷經(jīng)PNP酶與XO酶的順序水解作用與氧化作用形成尿酸。因此PNP酶位于XO酶的上游，通過(guò)補(bǔ)充嘌呤類藥物（食物）建立的高血尿酸癥動(dòng)物模型并不適用于評(píng)價(jià)PNP酶抑制劑的降尿酸效果。經(jīng)文獻(xiàn)檢索，有人曾對(duì)長(zhǎng)期服用肌苷即次黃嘌呤核苷導(dǎo)致無(wú)癥狀高尿酸血癥的臨床事件進(jìn)行了報(bào)道，但尚未有文獻(xiàn)資料提及可用肌苷作為升高血尿酸的誘導(dǎo)劑來(lái)建立高尿酸血癥的動(dòng)物模型用于降尿酸藥效評(píng)估。