主動脈弓縮窄術誘導小鼠肥厚型心肌病模型

心肌肥厚，心功能下降，心肌細胞間膠原沉積，HE染色及馬松染色顯示心機纖維化樣改變，心肌細胞壞死增多。電鏡顯示心肌細胞缺氧，線粒體形態及功能異常。馬松結果顯示，TAC手術組心臟出現膠原沉積。手術造模后6-8周，心臟超聲檢測心功能顯著降低，證明心肌病的發生。

實驗中涉及動物的操作程序已經得到中國醫學科學院醫學實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會的批準(ILAS-GC-2012-001)。

超聲心動圖顯示小鼠左心室及室間隔不對稱增厚、射血分數降低約20%、心功能顯著降低。組織化學檢測顯示心肌細胞異常肥大，排列方向紊亂出現顆粒狀改變。小鼠易猝死。

18-20g雄性C57小鼠，根據體重戊巴比妥鈉麻醉，劑量50mg/Kg，仰臥位固定于加熱墊上保持體溫，頸部及胸前用脫毛膏脫毛，酒精消毒處理，實施氣管插管后，使用呼吸機，小鼠呼吸頻率120次/分，觀察動物呼吸頻率與呼吸機同步后，從心臟部位第二肋間隙剪開皮膚，、胸肌、肋間肌，擴胸器撐開肋間隙，顯微鑷分離胸腺暴露主動脈弓，于無名動脈和左頸總動脈間動脈弓下方放置一小段6.0縫合絲線 ，并圍繞動脈弓打活結備用，將27G平頭針頭插入活結內并與動脈平行放置，拉活結將針和動脈系緊，隨即再系一扣，迅速取出針，即獲得理論直徑為0.4 m m的無名動脈遠端主動脈弓手術性狹窄。將胸腺復位，6.0聚丙烯縫合線依次縫合肋間肌及皮膚，觀察動物情況，將氣管插管拔出，去除固定牙齒皮筋及四肢膠帶。腹腔注射給予青霉素0.2ml，注意保暖， 如呈現脫水現象可腹腔注射生理鹽水，待蘇醒后放回鼠盒。

高血壓是由多基因、多環境因素及個人不良習慣相互作用而導致的一種慢性復雜疾病，也是危害人類健康的主要疾病之一。鹽是高血壓的重要環境因素，個體對鹽負荷或限鹽呈現不同的血壓反應，因此存在鹽敏感性問題[1]。鹽敏感性是高血壓、心腦血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和腎功能不全等）發病及致死的一個潛在危險因素 [2]。因此在高血壓臨床診治過程中，考慮鹽敏感性將有利于對高血壓分類、危險分級以及對癥治療。

鹽敏感性通常涉及人口、種族、社會因素以及腎功能、激素水平和飲食習慣等[3]。不同種族和人群鹽敏感性個體的檢出率不同，而且血壓的鹽敏感性隨年齡增長而變化，特別是高血壓患者。鹽敏感性由Weinberger ADDIN EN.CITE[4]給出定義：靜脈滴注2L生理鹽水，測量平均動脈壓（MAP），次日早晨給予低鈉飲食后再測量MAP，兩次MAP相差≥10mmHg為鹽敏感性，否則為鹽耐受性。Yatabe ADDIN EN.CITE ADDIN EN.CITE.DATA [5]定義鹽敏感指數（SSI）為低鹽和高鹽飲食后MAP的差值與低鹽飲食MAP的商，若SSI≥5%為鹽敏感性。

高鹽攝入引起血壓升高主要有兩方面原因：一方面是腎小管對Na+ 重吸收增加，導致水鈉潴留，血漿容量增加，從而血壓升高；另一方面是內源性哇巴因物質分泌增多，特異性抑制鈉泵，胞內鈉離子濃度增加，Na+/Ca2+交換體被激活，細胞內Ca2+ 濃度升高，最終導致血管平滑肌或心肌收縮，引起高血壓[6]，可見鈉水調節紊亂是鹽敏感性高血壓發病的主要誘因。有研究表明，胃腸道在維持機體鈉水平衡方面具有重要的作用。人體胃腸道每天大約吸收7～9升液體，這一吸收過程主要是由鈉依賴的營養物質同向轉運體和鈉離子轉運體共同介導。在基礎狀態和進食后，小腸內鈉吸收主要是通過鈉氫交換體（NHE）。在小腸細胞的頂膜上，將腸腔內的鈉轉運至小腸細胞的電中性鈉氫交換體主要有NHE2、NHE3和NHE8，在結腸中主要的電中性鈉吸收通道為ENaC。在這些鈉吸收通道中NHE3是非常重要的一個鈉離子吸收通道。但小腸NHE3的特異性作用還不清楚。DR. Rieg構建了小腸特異NHE3敲除小鼠VillinCre, 并發現該小鼠成年率為0，均為出生后幾天死亡，證實腸道中NHE3調節鈉水平衡至關重要。

基于腸道NHE3對于機體鈉水平衡的調節作用，相關領域已經開展了NHE3抑制劑藥物用于高血壓治療的研究，但是NHE3抑制劑都存在明顯的副作用，大鼠及人體實驗證實NHE3抑制劑藥物能夠引發中度或重度腹瀉。已有測序研究發現NHE3編碼基因SLC9A3與先天性鈉腹瀉（CSD）密切相關，SLC9A3 基因N端鈉離子轉運結構域發生突變，能夠引發NHE3功能缺失，從而誘導CSD發生。提示直接抑制NHE3的藥物雖然能夠顯著降低血壓及鈉離子重吸收，但無法解決對機體的副作用。因此，我們研究通過其它通路間接抑制NHE3功能來降低血壓。最新研究發現，胃泌素不僅能夠調節胃酸分泌，還對機體內腎臟鈉氫交換體3（NHE3）等離子泵具有重要的調節作用。同時，我們實驗室先前的研究結果也表明，胃泌素能夠通過抑制NHE3活性參與機體鈉水代謝和血壓調節，從而改善鹽敏感性高血壓大鼠的血壓狀況。由于小腸中存在大量的胃泌素受體，因此我們采用基因工程的方法，敲除小腸道CCKBR基因以抑制胃泌素對NHE3活性的調節作用，從而造成胃腸道鈉水平衡的失調，誘導小鼠鹽敏感性高血壓模型。