肌苷致急性高尿酸血癥恒河猴模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機制提供了工具。

模型動物飼養(yǎng)在武漢大學人民醫(yī)院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實驗準備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機房和配電室等。

（2）設計參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數(shù)：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風和空調(diào)系統(tǒng)

動物實驗室采用全新風中央空調(diào)通風系統(tǒng)?？諝饨?jīng)過初、中、三級過濾器后進入實驗室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養(yǎng)室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關(guān)，根據(jù)實際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因為SPF級動物實驗室的環(huán)境和設施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機保持聯(lián)系，保證實驗室內(nèi)外信息的及時溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機，能夠及時了解設施的運行狀態(tài)；也能有效督促實驗人員執(zhí)行科學的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態(tài)和反應進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實驗準備室，設置接水槽，為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報系統(tǒng)和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導致環(huán)境設施的污染、動物感染或死亡，造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應急電源。在中央空調(diào)機房控制室安裝風機故障警報系統(tǒng)，以便及時檢修和維護，保證設施的安全運行。

（9）消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準，進行科學配制生產(chǎn)。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養(yǎng)成分指標，保證飼料的質(zhì)量。

1. 血清尿酸水平變化

模型組動物血清尿酸水平顯著高于空白（表1）。

表1. 造模不同時間點血尿酸值對比

1. 誘導劑準備

肌苷(Inosine)：14125-10G，Lot#019K1124V，CAS：58-63-9，Sigma。

2. 實驗動物

雄性恒河猴，體重6-8kg。

3. 給藥

4只恒河猴分為4組：造模組和生理鹽水對照組。造模組腹腔給與不同劑量的肌苷溶液造模。高劑量組（100mg/kg）、中劑量組（50mg/kg）、低劑量組（25mg/kg），給藥體積為2ml/kg。

4. 模型分析指標

（1） 尿酸水平檢測

在不同時間點取血約2ml，對比不同時間點血尿酸值，時間點設置為：0h（即造模前取空白對照血液）、造模后0.5h、1h、2h、4h、8h、24h。血樣室溫靜置30min后，4000r/min離心10min，取血清立即凍存于-80攝氏度冰箱，待所有時間點取血清完成后按試劑盒方法（磷鎢酸法）測定尿酸值。

高尿酸血癥是由各種因素引起的尿酸產(chǎn)生過多、或腎臟排出尿酸減少、或兩者兼有，致使血液中尿酸鹽超過正常水平（6 毫克/100 毫升）的病理狀態(tài)。高尿酸血癥是痛風最重要的生化基礎，并且與心血管疾病、免疫系統(tǒng)紊亂等密切相關(guān)，嚴重危害人類健康。目前臨床上用于治療高尿酸血癥的藥物以抑制尿酸生成和促進尿酸排泄為主。隨著分子生物技術(shù)的快速發(fā)展和人們對高尿酸血癥發(fā)病機制和遺傳學認識的日益加深，新的治療靶點不斷被發(fā)現(xiàn)，新型治療藥物也相繼問世。尋找更加合理、科學的藥效學評價動物模型迫在眉睫。

以美國Biocryst公司研發(fā)的新型降血尿酸藥物Ulodesine為例，其降尿酸機制主要通過抑制嘌呤核甘磷酸酶（PNP）活性，進而減少次黃嘌呤及黃嘌呤在體內(nèi)的積累，以達到降低血尿酸的目的。隨著該藥二期臨床終點的到達，PNP靶點得到了廣泛關(guān)注?，F(xiàn)有的抑制尿酸生成的市售藥物均以黃嘌呤氧化酶（XO）為治療靶點，而從尿酸生成途徑來看，肌苷經(jīng)PNP酶與XO酶的順序水解作用與氧化作用形成尿酸。因此PNP酶位于XO酶的上游，通過補充嘌呤類藥物（食物）建立的高血尿酸癥動物模型并不適用于評價PNP酶抑制劑的降尿酸效果。經(jīng)文獻檢索，有人曾對長期服用肌苷即次黃嘌呤核苷導致無癥狀高尿酸血癥的臨床事件進行了報道，但尚未有文獻資料提及可用肌苷作為升高血尿酸的誘導劑來建立高尿酸血癥的動物模型用于降尿酸藥效評估。

靈長類尿酸排泄途徑與人類相似。且經(jīng)Ulodesine及非布索坦等尿酸合成抑制劑在該模型上降尿酸作用的驗證，其不僅可用于評價PNP酶抑制劑的降尿酸作用，也適用于XO抑制劑降尿酸效果的評估。