鏈脲霉素誘導(dǎo)糖尿病周圍神經(jīng)病變大鼠模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結(jié)合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發(fā)病機制提供了工具。

模型動物飼養(yǎng)在武漢大學(xué)人民醫(yī)院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設(shè)計。屏障系統(tǒng)內(nèi)共有大鼠飼養(yǎng)室1間，小鼠飼養(yǎng)室3間，隔離觀察室1間，實驗準(zhǔn)備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統(tǒng)外配有監(jiān)控室、機房和配電室等。

（2）設(shè)計參數(shù)

室內(nèi)溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數(shù)：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數(shù)：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風(fēng)和空調(diào)系統(tǒng)

動物實驗室采用全新風(fēng)中央空調(diào)通風(fēng)系統(tǒng)。空氣經(jīng)過初、中、三級過濾器后進(jìn)入實驗室內(nèi)環(huán)境。

（4）照明系統(tǒng)

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養(yǎng)室、實驗準(zhǔn)備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關(guān)，根據(jù)實際需要，調(diào)節(jié)控制室內(nèi)照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統(tǒng)

因為SPF級動物實驗室的環(huán)境和設(shè)施具有特殊要求，人員進(jìn)入后不能隨意出入，而室內(nèi)外的聯(lián)系又十分重要，故室內(nèi)各房間均安裝內(nèi)部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內(nèi)電話可相互連通，并均與監(jiān)控室總機保持聯(lián)系，保證實驗室內(nèi)外信息的及時溝通。

（6）監(jiān)控系統(tǒng)

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養(yǎng)室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉(zhuǎn)的攝像機，能夠及時了解設(shè)施的運行狀態(tài)；也能有效督促實驗人員執(zhí)行科學(xué)的操作規(guī)程，避免人為因素造成室內(nèi)環(huán)境和設(shè)施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態(tài)和反應(yīng)進(jìn)行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統(tǒng)

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統(tǒng)內(nèi)實驗準(zhǔn)備室，設(shè)置接水槽，為實驗動物供應(yīng)滅菌的飲用水和屏障系統(tǒng)內(nèi)用水。要經(jīng)常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當(dāng)比例的84消毒液。

（8）供電系統(tǒng)、警報系統(tǒng)和消防設(shè)施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風(fēng)和供電，如果出現(xiàn)故障，不能及時發(fā)現(xiàn)和處理，就可能導(dǎo)致環(huán)境設(shè)施的污染、動物感染或死亡，造成嚴(yán)重后果。因此應(yīng)對SPF級動物實驗室使用獨立穩(wěn)定的供電系統(tǒng)，并配備有應(yīng)急電源。在中央空調(diào)機房控制室安裝風(fēng)機故障警報系統(tǒng)，以便及時檢修和維護(hù)，保證設(shè)施的安全運行。

（9）消毒滅菌設(shè)備

為防止外界物品進(jìn)入SPF級動物實驗室時所攜帶的細(xì)菌污染室內(nèi)環(huán)境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進(jìn)行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或?qū)Ｓ玫臋C動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養(yǎng)籠具

飼養(yǎng)大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養(yǎng)有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內(nèi)環(huán)境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術(shù)后的恢復(fù)、生長發(fā)育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產(chǎn)型飼料和維持型飼料必須嚴(yán)格按照國家標(biāo)準(zhǔn)，進(jìn)行科學(xué)配制生產(chǎn)。每半年檢測一次飼料的微生物指標(biāo)和有效營養(yǎng)成分指標(biāo)，保證飼料的質(zhì)量。

注射鏈脲霉素后6周，大鼠足底熱板潛伏期和機械刺痛力都明顯降低；注射后10周血紅細(xì)胞中Na+-K+-ATP酶活力也明顯降低，提示大鼠發(fā)生痛覺和熱覺敏感，紅細(xì)胞變形能力降低，具有周圍神經(jīng)病變的表型。

1. 檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液配制

稱取1.197 g檸檬酸，1.264 g檸檬酸三鈉，加90 ml雙蒸水完全溶解后調(diào)節(jié)pH值至4.4，定容至100 ml，4度保存?zhèn)溆谩?/p>

2. 鏈脲霉素溶液配制（65 mg/kg）及注射

采用檸檬酸-檸檬酸三鈉緩沖液配制鏈脲霉素溶液，配制后避光冰浴保存。腹腔注射前所有大鼠禁食過夜（自由飲水），一般大鼠的注射體積為1 ml/100 g體重。

3. 實驗動物

可使用SPF級別的SD和Wistar大鼠，體重一般在160-180 g。

4. 模型分析指標(biāo)

注射鏈脲霉素后3天測定大鼠空腹血糖（禁食4 h，自由飲水），血糖水平大于200 mg/dL的大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)。6周后，測定大鼠足底熱板潛伏期、機械刺痛力和血紅細(xì)胞Na+-K+-ATP酶活力。與同批正常對照組大鼠相比，這些指標(biāo)明顯降低，表示模型成功。

糖尿病周圍神經(jīng)病變是由長期高血糖及相關(guān)病理生理改變而引起的神經(jīng)系統(tǒng)損傷，可累及全身周圍神經(jīng)系統(tǒng)的任何部分，其病理改變主要為神經(jīng)遠(yuǎn)端變性、神經(jīng)纖維喪失、節(jié)段性脫髓鞘和髓鞘再生。臨床常表現(xiàn)為疼痛、燒灼感、敏感、麻木、肌力減退等，嚴(yán)重時甚至出現(xiàn)肌肉萎縮、癱瘓、足部潰瘍甚至截肢。

糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)病機制復(fù)雜，至今尚未完全闡明。目前研究發(fā)現(xiàn)血管因素（血液供應(yīng)受損）和代謝因素（神經(jīng)元或神經(jīng)纖維內(nèi)部因高血糖導(dǎo)致病理生理改變）是兩大主要原因。目前公認(rèn)高血糖是糖尿病周圍神經(jīng)病變發(fā)病的始動因素，主要有4條途徑介導(dǎo)，包括多元醇通路活性增高、糖基化終末產(chǎn)物（Advanced glycation endproducts，AGEs）形成增加、己糖胺通路和蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）通路活性增高。