高脂肪飲食誘導小鼠非酒精性脂肪肝模型

該模型通過長期觀察普通狼瘡小鼠模型，待其到40周齡時，檢測其dsDNA等，結合皮膚癥狀變化，來確定慢性狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。

模型動物飼養在武漢大學人民醫院動物房SPF級動物實驗室，實驗動物使用許可證SYXK（鄂）2015-0027。

（1）建筑特點

門采用專用凈化密閉門并配備觀察窗。單向走道呈順時針走向設計。屏障系統內共有大鼠飼養室1間，小鼠飼養室3間，隔離觀察室1間，實驗準備室1間，潔物存放室1間，清洗消毒室1間。此外，屏障系統外配有監控室、機房和配電室等。

（2）設計參數

室內溫度：20～26°C；日溫差：≤4°C；相對濕度：40%～70%；換氣次數：15～20次/h；氣流速度：≤0．2m/s；壓強梯度：20～50Pa；空氣潔凈度：7級；菌落數：≤3個/皿；氨濃度：≤14mg/m3；噪聲：≤60dB；Z低工作照度：≥200lx；動物照度：15～20lx；晝夜明暗交替時間：12/12h。

（3）通風和空調系統

動物實驗室采用全新風中央空調通風系統?？諝饨涍^初、中、三級過濾器后進入實驗室內環境。

（4）照明系統

一更、淋浴、二更、氣閘、清潔走道、潔物存放處、污物走道、緩沖間和清洗消毒間、動物飼養室、實驗準備間、隔離觀察室和功能實驗室等安裝有手動和自動開關，根據實際需要，調節控制室內照明燈。未啟用房間、清潔走道、潔物存放處、污物走道等在每日中午12點和晚上8點開啟紫外線燈照射1h。

（5）通訊系統

因為SPF級動物實驗室的環境和設施具有特殊要求，人員進入后不能隨意出入，而室內外的聯系又十分重要，故室內各房間均安裝內部電話機，按照房間順序編排電話號碼，各室內電話可相互連通，并均與監控室總機保持聯系，保證實驗室內外信息的及時溝通。

（6）監控系統

對SPF級動物實驗室的出入口、走道、實驗動物飼養室、功能操作室等重要位置均安裝了可作270°旋轉的攝像機，能夠及時了解設施的運行狀態；也能有效督促實驗人員執行科學的操作規程，避免人為因素造成室內環境和設施的污染；并對整個實驗期間的動物狀態和反應進行觀察，減少對動物的滋擾。

（7）供水系統

SPF級實驗動物飲用水以純凈水為宜。本實驗室采用管道供水，將處理后的純凈水用塑膠管道輸送到屏障系統內實驗準備室，設置接水槽，為實驗動物供應滅菌的飲用水和屏障系統內用水。要經常更換和清洗輸水管道，清洗籠具的用水添加適當比例的84消毒液。

（8）供電系統、警報系統和消防設施

SPF級動物實驗室要求全天候不間斷供風和供電，如果出現故障，不能及時發現和處理，就可能導致環境設施的污染、動物感染或死亡，造成嚴重后果。因此應對SPF級動物實驗室使用獨立穩定的供電系統，并配備有應急電源。在中央空調機房控制室安裝風機故障警報系統，以便及時檢修和維護，保證設施的安全運行。

（9）消毒滅菌設備

為防止外界物品進入SPF級動物實驗室時所攜帶的細菌污染室內環境和造成動物交叉感染，按照不同物品的特性，進行紫外線照射消毒、渡槽消毒液消毒或專用的機動門真空滅菌器消毒。

（10）動物飼養籠具

飼養大、小鼠的籠具聚碳酸脂材料的塑膠籠具，具有高透明、耐高壓、耐高溫、耐酸堿等特點。通用的不銹鋼籠具長、寬、高分別為40、30、20cm，適用于單籠飼養有特殊要求的實驗動物，配有底盤和食槽，確保實驗動物有充足的采食和活動空間，同時也保證室內環境的清潔。

（11）墊料的選擇和使用

在使用塑膠墊料時，墊料是大小鼠直接接觸的鋪墊物，起到吸濕、保暖和造窩的作用。墊料的好壞直接影響到大小鼠術后的恢復、生長發育和繁殖性能。目前，所使用的墊料主要有玉米秸墊料、刨花墊料。

（12）飼料配制

大小鼠的生產型飼料和維持型飼料必須嚴格按照國家標準，進行科學配制生產。每半年檢測一次飼料的微生物指標和有效營養成分指標，保證飼料的質量。

1、肝臟大體形態變化

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續喂養12周,取肝臟組織。

圖1 肝臟大體形態變化

肉眼可見HFD小鼠模型肝臟呈黃色，輕度腫大。

2、肝臟脂肪水平指標檢測：

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續喂養12周,取肝臟組織，行Western Blot檢測脂肪肝相關指標。

圖2 脂肪肝相關指標檢測

3、肝臟脂滴染色

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續喂養12周,取肝臟組織，10%福爾馬林溶液固定，行油紅O染色。

圖3 肝臟組織切片油紅O染色

4、血清脂滴水平檢測

C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續喂養12周,取血清，檢測血清中脂滴表達水平。

圖4 血清脂滴表達情況

1.C57BL/6J 小鼠

品系來源 ：1921年 C.C.Little用 Lathrop小鼠作近親培育時，用No7雄鼠和No.52雌鼠交配，培育成C57。在C57中將毛色呈黑色的進行固定，培育成C57BL。1937年Ltle將維持的C57BL第六組亞系定名為C57BL6，將第十組亞系定名為C57BL10，繼而分別維持至今。1947年從 Little引入到美國 Jackson Lab，形成C57BL/6J:1951年從 Jackson Lab將第32代引入到NH，形成c57BL6N亞系；1974年 Charles River從NH引入并于1975年進行了剖腹產。六十年代從 Jackson Lab引入到日本實驗動物中央研究所,1986年自日本實驗動物中央研究所引入到中科院上海實驗動物中心。2001年中國北京維通利華從美國 Charles River引入第59代核心群。

2.高脂飲食對照小鼠：C57BL/6J小鼠，名稱：C57BL/6J小鼠，同類系（Consomic Rat）。

3.誘導方法：C57BL/6J小鼠給予高脂肪飼料連續喂養12周，每周監測小鼠體重、飲食及飲水，并分別在第6周和12周檢測糖耐量和胰島素耐量判斷模型進展。實驗結束前，禁食8小時，取血液測量血生化等指標，取肝臟進行稱重，病理及相關蛋白分析。

非酒精性脂肪性肝?。∟AFLD）分原發性和繼發性兩大類，前者與胰島素抵抗和遺傳易感性有關，而后者則由某些特殊原因所致。營養過剩所致體重增長過快和體重過重，肥胖、糖尿病、高脂血癥等代謝綜合征相關脂肪肝，以及隱源性脂肪肝均屬于原發性非酒精性脂肪性肝病范疇；而營養不良、全胃腸外營養、減肥手術后體重急劇下降、藥物/環境和工業毒物中毒等所致脂肪肝則屬于繼發性非酒精性脂肪性肝病范疇。

高脂肪飲食誘導非酒精性脂肪肝動物模型是目前應用于抗肝臟脂肪變性和脂肪肝病藥物評估的主要研究模型。非酒精性脂肪肝是無過量飲酒史、肝細胞內脂肪堆積以致肝細胞脂肪變性為主要特征的臨床病理綜合癥。20%碳水化合物、20%蛋白質和60%脂肪的高脂飼料連續喂養小鼠12周，小鼠吃進的食物所含的熱量過多，超過機體的需要，多余的熱量就會以脂肪的形式貯存起來，導致肝臟脂質堆積增加，肝細胞損傷加重。