DOCA誘導主動脈瘤小鼠模型

動物癥狀觀察：

表現為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個月后死亡。

1. 發現DOCA+HS處理兩周時，年老的C57小鼠即開始形成動脈瘤。

圖1.乙酸脫氧皮質酮（DOCA）加鹽在不同時間點對衰老小鼠主動脈瘤的誘導作用。A.老齡小鼠的代表性超聲圖像和主動脈照片在不同的時間點使用DOCA加鹽或單獨加鹽。B.量化腹主動脈的外徑。C. 老年小鼠施用DOCA加鹽或單獨加鹽后的存活曲線。D. 使用DOCA加鹽或僅在不同時間加鹽的成年小鼠的主動脈瘤發生率。

2. 乙酸脫氧皮質酮（DOCA）加鹽對衰老小鼠在不同時間點的血管病理學的影響。

圖2. A.來自DOCA加鹽或單獨加鹽的不同時間點的老年小鼠蘇木精和曙紅（HE）的主動脈染色的代表性照片。B. Masson染色的代表性照片顯示了不同組的膠原蛋白沉積。C. 彈性蛋白染色的代表性照片展示了來自不同群體的主動脈的彈性蛋白完整性。D. α-SMA（α-平滑肌肌動蛋白，血管平滑肌細胞）的免疫組織化學染色顯示在DOCA加鹽給藥后平滑肌細胞變性。

3. 醋酸脫氧皮質酮（DOCA）加鹽對衰老小鼠在不同時間點的炎癥細胞浸潤以及炎癥細胞因子、粘附因子和纖維化因子表達的影響。

圖3. A-C.免疫熒光檢測在不同時間點給予DOCA加鹽或鹽單獨處理的老齡小鼠主動脈組織中CD3陽性T細胞，CD68陽性巨噬細胞和ly6B.2陽性嗜中性粒細胞的浸潤。D. 主動脈中促炎因子（TNF-α，IL-6，IL-1β，CCL-2）的mRNA表達水平逐漸升高，而抗炎因子（IL-10，IL-13）的mRNA表達水平逐漸降低老年小鼠的組織施用DOCA加鹽。

4. 在DOCA加鹽處理過的小鼠的主動脈中差異表達的基因的RNA序列分析。

圖4. 在DOCA加鹽處理過的小鼠的主動脈中差異表達的基因的RNA序列分析，這些小鼠已形成動脈瘤（n = 3），未發育到動脈瘤（n = 5）。A.給予DOCA加鹽或僅加鹽的成年小鼠主動脈之間轉錄差異的熱圖。 | logFC | ≥2和Padj <0.005被設置為嚴格截止。B. 使用Reactome Pathway數據庫，以p <0.05為閾值，對上調和下調的差異表達基因進行GO富集分析。C. 熱圖顯示了一些關鍵的差異表達基因，這些基因富含止血，免疫系統和細胞外基質組織途徑。

1.C57小鼠，轉基因動物（PSGL-1-KO小鼠） ，名稱：C57，近交系（InbredRat）

品系來源 ：（1）遺傳背景及亞系:1921年Ltle用 Abbg Lathrop的小鼠株雌鼠57號與雄鼠52號交配，而得C57BL6。亞系:C57BL6、C57B/6、C57BL/6N等。 (2)毛色基因標記：aa、BB、CC（黑色）(3)主要遺傳學特征：a.免疫學特征：一般飼養條件下免疫球蛋白的量隨年齡而增加，而到生后20個月時則1gG增長緩慢，無菌飼養的絕對量較低。gM水平較高，出生12月以后，有的個體超過80ug/mL。無菌飼養的動物lgM量比一般飼養的高。細胞免疫低下者少見，這可能與自發腫瘤少有關。b.形態學特征：在新生鼠中，雌鼠為16.8%，雄鼠3%為小眼或無眼癥。0.6%后肢可見多趾癥，另外水頭癥占2%4%，耳頭癥占0.4%，交合不全占3%。c.生理學特性：有強嗜酒精性。對放射性照射為中等強度感應度，LD50為630+4R，將雄鼠皮膚移植到同系的雌鼠身上，約20日被排斥掉，這是因為在組織相容性抗原中的雄抗原在C57BL中非常顯著。d.癌發生率：乳癌發生率低，為01%，白血病為7%-16%化學致癌成功率低，放射性照射較容易誘發肝癌。

2.主動脈瘤對照小鼠：C57小鼠，名稱：C57，同類系（ConsomicRat）

3.誘導方法：C57小鼠根據體重，三溴乙醇麻醉0.18ml/10g體重，（360mg/kg體重）（三溴乙醇儲存液：25g三溴乙醇+15.5ml叔戊醇，使用液：0.50ml儲存液+39.5ml生理鹽水），俯臥位固定于加熱墊上保持體溫，背部頸部脫毛膏脫毛，酒精消毒處理，無菌手術剪剪開后背頸部皮膚，用鑷子將皮下探查出一個可以足夠裝下藥品的空間，將DOCA緩釋泵塞入皮下，鑷子將該處皮膚對齊復合，無菌縫合線縫合皮膚，放置在加熱板上保暖，待蘇醒后放回鼠盒，手術后用止痛果凍緩解疼痛。

主動脈瘤(aortic aneurysm)指主動脈壁局部或彌漫性的異常擴張超過正常值50%以上，壓迫周圍器官而引起癥狀，常發生在升主動脈主動脈弓、胸部降主動脈、胸腹主動脈和腹主動脈，其發病率在老年人群中可以高達5-10%，并呈上升趨勢。主動脈瘤可由多種因素引起，如家族遺傳、高血壓、動脈硬化等，其主要病理改變為血管壁彈力纖維斷裂、平滑肌細胞病變和血管外膜膠原沉積。

由于主動脈瘤是一種慢性血管炎癥性疾病，近年來可以誘發血管炎癥的多種因素與該疾病的發生機制研究一直被人們關注，包括鹽皮質激素、血管緊張素II等，其中醋酸脫氧皮質酮（DOCA）是一種類固醇激素，可以與體內的鹽皮質激素受體結合，影響機體內鈉水代謝，進而誘發慢性炎癥反應。有研究表明高鹽加DOCA緩釋刺激可以通過激發血管的炎癥反應而誘發小鼠動脈瘤的發生，并且該影響與年齡因素密切相關。本研究通過高鹽加DOCA的方法建立小鼠血管瘤模型，并觀察影響該疾病的相關通路因子，通過體內外實驗增加或降低關鍵通路因子，進一步探索該疾病的病理生理發生機制，為該疾病的預防治療提供新方法和思路。