獼猴局部腦缺血模型

動物癥狀觀察：

表現為體重減輕、弓背豎毛，在回輸后的一個月后死亡。

實驗中涉及動物的操作程序已經得到中國醫學科學院醫學實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會的批準(ILAS-GC-2012-001)。

1.行為學表型:動物會出現肢體運動失調、震顫等一系列行為學改變。在術后 2 h , 1 、2 、3 、7 、14 、21 、28 、35 d 內,使用經過修改 、細化的 Kito 靈長類動物神經功能損害評分表對模型動物進行意識、骨骼肌肉協調、感覺系統 、意識系統的行為學相關測試進行評價.

2.影像學表型 : 動物在進行影像學檢查時會出現明顯的影像學改變，在造模后 24 h 進行 PET 掃描，對病灶大小進行觀察記錄。

3.組織病理學表型:動物造模部位會出現梗死等病理學變化。在造模后2 、5 周后分別處 死動物 2 只動物 ,經生理鹽水及 10 %中性福爾馬林 心臟灌注后, 取腦組織進行固定、切片 , 通過 HE 染 色、特殊染色等染色方法觀察梗死灶周圍的病理學改變。

動物清醒后表現出不同程度的腦缺 血癥狀與體征。 病理學檢查可見明顯的壞死灶。 壞死灶周圍腦組織水腫, 神經細胞變性壞死。

A 造模12小時梗死灶面積3.6*11.6mm；B造模后12小時，腦組織內毛細血管擴張充血，腦組織水腫； C造模后12小時，大腦皮質局部水腫，神經細胞變性壞死，大量吞噬棕黃色色素的泡沫細胞浸潤； D造模后35天梗死灶面積1.2*6mm ；E造模35天后腦組織壞死，泡沫細胞浸潤；F造模35天后腦組織壞死區毛細血管內黃色結晶，泡沫細胞浸潤。

麻醉后的動物采用俯臥位固定在立體定位儀上 ,顱頂區備皮 ,常規消毒手術區皮膚,沿矢狀面在顱頂正中切開長約 4 ～ 5 cm 的切口 ,逐層分離皮下組織、帽裝肌腱 、肌肉、骨膜 , 用擴張器充分暴露手術視野。使用便攜式顱鉆在頂 骨裂處進行顱骨鉆孔 , 以鉆透顱骨 , 達硬腦膜為止 (有落空感)。鉆好的孔為橢圓形 ,大小為 3.0 cm × 1.5 cm , 其長軸與顱骨正中線垂直。將冷光源發生 器的發光口固定與顱頂開口處。周圍用浸透生理鹽水的無菌紗布覆蓋傷口 。用鋁箔紙遮蓋動物眼睛, 避免光化學反應對動物視網膜的損害。靜脈注射玫 瑰紅 B35 mg kg ,從注射完畢開始計時 , 5 min 后打開 光源 ,電子光強選擇 6 ,機械光強選擇, 照射 10 min 。 第一次注射后 10 min 第二次注射玫瑰紅 B , 濃度與 第一次相同。照射完畢后,向顳側移動光源發光口, 在第二點照射 10 min 。縫合骨膜 、皮膚。肌肉注射青霉素 40 萬 單位預防感染 。

腦血管疾病嚴重危害人類健康, 是目前人類發病率最高的疾病之一 ,并常導致殘疾, 給社會和家庭帶來沉重負擔。在腦血管疾病中以缺血性疾病的 發病率占據首位 。血管缺血性損傷是由于各種原因誘發腦血管栓塞引起腦組織缺血、缺氧 ,進一步誘發腦神經細胞變性、壞死 ,最終導致神經功能障礙 、喪失的一類疾病。在臨床上 , 引起缺血性損害的原因多種多樣。由于缺血是一種供血異常, 血管因素在其中發揮重要作用。

獼猴在進化上與人類高度同源，種屬差異小，在組織結構和生理特征上與人類極為相似，這一突出特點奠定了恒河猴動物在藥物生產和評價、功能和進化比較基因組學研究、人類重大疾病模型復制和應用、再生醫學等研究領域中不可或缺的優勢地位