三轉基因銀屑病小鼠模型

該模型通過埋植雌激素，進而建立了皮膚型狼瘡動物模型，主要是檢測其dsDNA，腎臟變化，結合皮膚癥狀變化，來確定狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，創新點在于該模型可快速建立模型，屬于誘導性狼瘡皮膚病模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。目前國際無報道。

無安全性問題。

（一）三轉基因小鼠基因型

用顯微注射法將線性化的轉基因載體注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，轉入到假孕受體ICR小鼠中，小鼠出生后9-14d提取基因組DNA，用PCR擴增目的基因片段來檢測轉基因小鼠，三種目的基因片段分別為PLAU基因545bp，PLAUR基因475bp，STAT3基因550bp（圖1）。

圖1 PCR鑒定轉基因小鼠基因型

注：P：陽性對照；N：陰性對照；W：空白對照；M：DNA相對分子質量標記； 1、4、7是F0代陽性轉基因小鼠；2、3、5、6、8是F0代陰性小鼠。

（二）人PLAU，PLAUR及鼠STAT3三種基因的表達

首先用Western blot 分析1月齡的轉基因小鼠皮膚中人PLAU，PLAUR及鼠STAT3的表達情況，結果顯示三種蛋白在皮膚中均有表達，表達量各有差別（圖2）。

注：WT：野生型小鼠；TG1、TG4、TG7：轉基因小鼠；內參：β-actin。

（三）轉基因小鼠與同齡野生型小鼠表皮差異

Westernblot 結果顯示TG4皮膚中主要高表達PLAU和STAT3，而TG7皮膚中PLAU，PLAUR和STAT3均高表達。 和TG4小鼠比較TG7小鼠表型更明顯，說明三種基因同時表達對病理發生是關鍵。TG7小鼠在1月齡就表現腹部毛發稀疏，無光澤，表皮粗糙，至4月齡表現典型腹部皮膚紅腫和炎癥（圖3）。皮膚炎癥主要表現在腹部，背部表型不明顯。除皮炎表型外，小鼠生育和發育無異常。

（四）皮膚病理表型

選用4月齡的轉基因陽性和同齡野生小鼠，取背部及腹部皮膚，HE染色，鏡下觀察顯示，轉基因小鼠真皮變簿（圖4A），表皮過度角化和棘層增厚（圖4B），毛囊減少和發育異常，部分毛囊內未見毛干（圖4C），角化不全區域內可見中性白細胞構成的小膿腫（Munro氏小膿腫）和真皮炎細胞浸潤（（圖4D）。

圖4 病理觀察

注：對4月齡野生型小鼠（WT）和三轉基因基因小鼠（TG7）的腹部皮膚進行H&E染色和病理觀察，顯示轉基因小鼠真皮變薄（A，白色箭頭所示），表皮過度角化（B，黑色箭頭所示）和棘層增厚（B， 黃色箭頭所示），毛囊減少和發育異常（C，紅色箭頭所示），出現Munro氏小膿腫（D，綠色箭頭所示）和真皮炎細胞浸潤（D，藍色箭頭所示）。

銀屑病是人類特有的一類疾病，在動物中少見，銀屑病動物模型的制作主要采用化學制劑誘導，基因修飾或組織移植等方式制備，可以在一定程度上模擬銀屑癬的病理表型、慢性炎癥等，但是各有優缺點。信號傳導與轉錄激活因子3（signal transducerand activator of transcription 3，STAT3）是STAT轉錄因子家族的一員，STAT3參與皮膚傷口的愈合、角質細胞遷移、毛囊生長、抵抗皮膚的放射損傷等，皮膚轉基因表達活化的STAT3可引發類似銀屑病的病變，而抑制STAT3表達可以改善銀屑病癥狀；尿激酶型纖溶酶激活劑（Plasminogenactivator, urokinase，PLAU）是多種血纖維蛋白溶酶原的激活因子，PLAU 和PLAU受體（Plasminogenactivator, urokinase receptor，PLAUR，）也叫做UPAR或CD87，都在皮膚組織表達，PLAU/PLAUR表達升高可能是銀屑病發生的重要原因。利用轉基因技術，將STAT3、PLAU和PLAUR同時轉入小鼠基因組，建立皮膚特異表達三種基因的轉基因小鼠，小鼠表現毛囊發育異常、表皮過度增生和慢性炎癥，可以作為多病因綜合小鼠銀屑病。

用PCR的方法克隆人PLAU，PLAUR及鼠STAT3三種基因的開放閱讀框，，均插入表皮特異性表達啟動子下游構建人PLAU，PLAUR及鼠STAT3三種表達載體。用顯微注射法將三種混合后的轉基因載體注射到C57BL/6J小鼠的受精卵中，制備三轉基因銀屑病小鼠

一、疾病名稱

銀屑病（牛皮癬，Psoriasis）是一種以表皮過度增生和真皮慢性炎癥反應為特征的常見皮膚病。白色人種發病率較高約為2-5%，黃種人發病率較低約為0.5%, 難根治，易復發。目前發病原因不明，與呼吸道感染，胃炎，飲食習慣，精神緊張、憂慮，不當使用激素藥物等有關。

二、疾病臨床表現及致病機制

（一）銀屑病根據臨床表現可分為四種類型：

1.尋常型銀屑病

為最常見的一型，多急性發病。典型表現為境界清楚、形狀大小不一的紅斑，周圍有炎性紅暈。稍有浸潤增厚。表面覆蓋多層銀白色鱗屑。鱗屑易于刮脫，刮凈后淡紅發亮的半透明薄膜，刮破薄膜可見小出血點（Auspitz征）。皮損好發于頭部、骶部和四肢伸側面。部分患者自覺不同程度的瘙癢。

2.膿皰型銀屑病

較少見，分泛發型和掌跖型。泛發性膿皰型銀屑病是在紅斑上出現群集性淺表的無菌性膿皰，部分可融合成膿湖。全身均可發病。以四肢屈側和皺褶部位多見，口腔黏膜可同時受累。急性發病或突然加重時常伴有寒戰、發熱、關節疼痛、全身不適和白細胞計數增多等全身癥狀。多呈周期性發作，在緩解期往往出現尋常型銀屑病皮損。掌跖膿皰病皮損局限于手足，對稱發生，一般狀況良好，病情頑固，反復發作

3.紅皮病型銀屑病

又稱銀屑病性剝脫性皮炎，是一種嚴重的銀屑病。常因外用刺激性較強藥物，長期大量應用糖皮質激素，減量過快或突然停藥所致。表現為全身皮膚彌漫性潮紅、腫脹和脫屑，伴有發熱、畏寒、不適等全身癥狀，淺表淋巴結腫大，白細胞計數增高。

4.關節病型銀屑病

又稱銀屑病性關節炎。銀屑病患者同時發生類風濕性關節炎樣的關節損害，可累及全身大小關節，但以末端指（趾）節間關節病變最具特征性。受累關節紅腫疼痛，關節周圍皮膚也常紅腫。關節癥狀常與皮膚癥狀同時加重或減輕。血液類風濕因子陰性。

（二）目前認為，本病的發生不是單一的原因，可能涉及多方面。

1.遺傳

相當一部分患者有家族性發病史，有的家族有明顯的遺傳傾向。一般認為有家族史者約占30%。發病率在不同人種差異很大。銀屑病是遺傳因素與環境因素等多種因素相互作用的多基因遺傳病。本病患者的某些HLA抗原出現率顯著增高。銀屑病與其他疾病（如類風濕性關節炎，特應性皮炎等）遺傳位點可能存在重疊。

2.感染

許多學者從體液免疫（抗鏈球菌組），細胞免疫（外周血及皮損T細胞）、細菌培養和治療等方面均證實鏈球菌感染與銀屑病發病和病程遷延有關。在銀屑病患者，金黃色葡萄球菌感染可使皮損加重，這與金葡菌外毒素的超抗原有關。本病的發生與病毒（如HIV病毒）和真菌（如馬拉色菌）感染雖然有一定關系，但其確切機制尚未能最后證實。

3.免疫異常

大量研究證明銀屑病是免疫介導的炎癥性皮膚病，其發病與炎癥細胞浸潤和炎癥因子有關。

4.內分泌因素

部分女性患者妊娠后皮損減輕甚至消失，分娩后加重。

5.其他

精神神經因素與銀屑病的發病有一定關系。飲酒、吸煙、藥物和精神緊張可能會誘發銀屑病。