社會挫敗小鼠模型

給予動物鼠籠傾斜、潮濕墊料、高溫、噪音、束縛、電擊、游泳、晝夜節律顛倒等不同刺激因子，且刺激因子安排為多變性和不可預測，可誘導性是模型制造成功的關鍵。該模型被廣泛用于抑郁癥神經生物學機制及抗抑郁藥物的研究，以及伴發的焦慮、學習記憶障礙及防護藥物研究。

本研究中，通過水迷宮實驗、避暗實驗結果可以看CUMS模型組水迷宮尋臺潛伏期顯著性延長，避暗錯誤次數顯著性增加、避暗潛伏期顯著性減少等，這些行為學結果，提示大小鼠CUMS模型成功。此外本實驗還對CUMS模型的機制進行了基礎研究，認為CUMS模型會導致動物皮層的5-HT、DA、Ach、NE等神經遞質水平顯著性降低（P<0.05）。因此我們認為采用慢性不可預測應激，35天可以造成大鼠和小鼠學習記憶障礙。

模型技術難點在于對于CUMS刺激因子的選擇，刺激因子的選擇可能影響實驗模型的成功與否，常用的刺激因子有禁食(12 h)、禁水(12 h)、冷水游泳(4 °C，5 min)、熱水游泳(42 °C，5 min)、動物叫聲(0.5 h)、束縛(使用自行研發的小鼠行為限制器，長20 cm，直徑7 cm)、晝夜顛倒、配對飼養、濕籠、傾籠等。每日選擇2~3 種刺激，并盡量使應激程序符合不可預測的特點，以避免動物產生適應性。相同的刺激因子應該隔3-7日再進行。

本研究通過不同的刺激因子對老鼠造成慢性不可預測應激模型，通過水迷宮、避暗等經典行為學指標，以及5-HT、DA、Ach、NE等神經遞質基礎機制指標，表明了慢性不可預測應激誘導老鼠學習記憶損傷模型的成功，并且該模型對于大小鼠具有相同的效果，本模型可用于進一步的改善學習記憶藥物的藥效學評價。

本實驗采用健康成年SPF級老鼠。飼料墊料均為高壓滅菌產品，購自北京維通利華實驗動物有限公司，動物用水均經過除菌處理。實驗動物以完整的包裝直接進入實驗室，觀察適應5天后無異常情況，方進行實驗。實驗過程中動物操作均符合動物倫理學規范，對環境和生態影響等符合國家相關法律規定。

1. 不同時長社會挫敗對懸尾不動時間的影響

可以從圖1 看出，社會挫敗造模21天后，模型組與空白組存在顯著性差異，陽性藥組可以顯著性降低懸尾不動時間（P < 0.05）。

圖1 不同時長社會挫敗對懸尾不動時間的影響

2. 社會挫敗對強迫游泳不動時間的影響

可以從圖1 看出，社會挫敗造模7天，強迫游泳不動時間就比空白組出現顯著性增加（P< 0.05），但是造模14天并沒有出現顯著性差異（P > 0.05），造模21天后又出現顯著性差異（P < 0.05）。

圖2 不同時長社會挫敗對強迫游泳不同時間的影響

C57BL /6J小鼠。雄性多見。

1. 操作流程

實驗前將小鼠隨機分為對照組和應激組，每天將應激組C57BL /6 小鼠作為侵入者放入長期單獨飼養CD1 小鼠的籠內，進行身體接觸5 min。5 min 內C57BL /6 小鼠將受到CD1小鼠攻擊并表現出逃跑、恐懼、順從等從屬性特征。5 min 身體接觸后，使用透明并且有很多小孔的有機玻璃板將二者隔開進行心理應激24 h，保證C57BL /6 小鼠能看到CD1 小鼠，聽到CD1 小鼠的聲音，而且能聞到CD1 小鼠的氣味，應激持續7d或21 d。應激結束后，將C57BL /6 小鼠單獨飼養，進行行為學評價。

為了評估應激組C_57小鼠的社會交互行為，在接受最后一次攻擊的24小時內開展社會交互實驗。實驗設備還包括40cmx40cmx40cm大小的白色開放場，7cmx10cmx 40cm大小穿孔透明塑料盒及錄像設備。社會交互測試由兩部分組成，每部分記錄時長為2.5分鐘。第一部分，將塑料空盒置于測試場一側中央位置，輕輕提放被測試者(C57小鼠)于曠場中央，自由活動; 150秒后，將被測試者移除放于自身飼養籠中;同時將具有攻擊性的CD1小鼠放在塑料盒內，準備結束后重新放入被測試者。前后兩次操作中間的準備時間控制在30s內。分別記錄2個部分動物在社會交互區的時間。社會交互區定義為以塑料盒為中心，允許C_57小鼠與盒子及里面的CD1鼠進行互動的區域。

2. 模型分析指標

2.1 懸尾實驗

于造模結束后第3 天開始實驗。將膠布貼于距小鼠尾尖部約1 cm 處，使小鼠倒掛于懸尾箱支架上，傳感器接收小鼠掙扎時的張力變化信號，將信號處理轉化后送往計算機，小鼠懸尾實時檢測分析處理系統自動記錄小鼠不動時間，實驗總共6 min，適應2 min 后系統自動統計小鼠后4 min 內懸尾累積不動時間(“不動”即小鼠停止掙扎不動或無任何活動)。

2.2 強迫游泳

利用計算機圖像實時檢測分析處理系統自動分析記錄動物運動狀態。將小鼠放入小鼠強迫游泳儀器中( 高20 cm，直徑18 cm，水深12 cm)，保持水溫(23~25 °C)。動物適應2 min后，系統自動記錄動物后4 min 內的累積不動時間( 不動狀態即小鼠四肢有輕微動作以保持頭部在水面，小鼠呈現出停止掙扎或呈漂浮狀態)。

抑郁癥是由抑郁癥是一種嚴重影響人體健康的精神疾病，其患病率約占總人口的3%。世界衛生組織預測到2020年抑郁癥將成為第二大主要疾病之一，給社會帶來極大經濟負擔，抑郁癥已成為全世界共同面臨的衛生健康難題。近年來研究發現，應激性生活事件是抑郁癥的顯著促發因素，引發抑郁的主要原因是來自慢性、低強度、長期的日常壓力。

目前，抑郁癥尤其是中重度抑郁癥的主要治療手段仍是藥物治療。20多年以來，隨著人們對抑郁癥機制研究的深入，抗抑郁藥物的研究開發也取得了極大進步。由于合成抗抑郁藥大多存在抗抑郁譜窄、不良反應大、藥價高和易復發等缺陷，人們逐漸把目光投向傳統的中醫藥。傳統藥物和天然藥物作為抗抑郁候選藥物的研究開發已日漸成為國內外的熱點。

采用社會失敗應激，更好地模擬人類抑郁癥的發生方式，建立動物模型對于探索抑郁癥的病因學是很有必要的。另外，社會失敗應激所導致興趣缺失和社會逃避的抑郁行為是長久潛伏的，通過慢性而不是急性的抗抑郁治療可以糾正社會失敗應激所致的抑郁行為，我們的相關研究結果也與此一致(將另文報道)。通過社會失敗應激模型，可以建立穩定的用于研究抑郁病理生理學的動物模型。