哮喘-慢性阻塞性肺疾病重疊癥小鼠模型

采用OVA、LPS和煙熏共刺激方法建立的ACO小鼠模型可較好模擬ACO的臨床病理特征。

本實驗采用昆明種6-8周齡的健康成年小鼠，體重均在33±2g，SPF級。飼料墊料均為高壓滅菌產品，購自北京斯貝福生物科技股份有限公司，動物用水為實驗室制UP水經過除菌處理。飼養及實驗操作均于具有檢驗合格資質的SPF級屏障動物室內進行，并且實驗動物以完整的包裝直接進入屏障實驗室，觀察室適應7天后無異常情況，方可進行實驗。所有實驗中小鼠均引頸處死，盡量減少動物手術創傷程度及失血量。實驗過程中動物操作均符合動物倫理學規范，對環境和生態影響等符合國家相關法律規定。

ACO小鼠表現出咳嗽，呼吸急促，喘息，分泌物增加，厭食，毛發褪色以及身體瘦小，這些癥狀都與臨床特征和病程相似。

HE染色檢測小鼠肺組織病理學變化，結果顯示，ACO組的組織病理學與COPD模型組相似，但是，浸潤由嗜酸性粒細胞組成并呈彌漫性病變。采用血細胞分類計數儀檢測肺泡灌洗液(BALF)中白細胞分類計數的變化，與對照組相比，ACO組小鼠的BALF中總白細胞，淋巴細胞，單核細胞，嗜中性粒細胞和嗜酸性粒細胞水平升高。Elisa法檢測BALF中炎性因子以及血清中IgE和IgG1水平的變化，ACO組的IL-4，IL-6，TNF-α，IFN-γ，IL-1β和IL-17A的水平較高，總IgE和IgG1水平顯著升高。

將Balb/C小鼠隨機分為對照組、asthma組、COPD組、ACO組。Asthma組于實驗第0、7、14天腹腔注射OVA+100 μL氫氧化鋁凝膠致敏，第26-28天，連續三天氣管滴注OVA溶液進行攻擊。COPD組于第15天和28天給予脂多糖(LPS)氣管滴注，第16-27和29-42天給與煙熏。ACO組和給藥組同時進行asthma和COPD造模流程。對照組給予同等劑量的生理鹽水。未次熏煙24小時后，麻醉處死動物并取材。

哮喘-慢性阻塞性肺疾病重疊（asthma-COPDoverlap，ACO），是一種同時具有哮喘和COPD特點的臨床綜合征，用以描述同時具有這兩種疾病特點的患者。2017年GINA報道，在多項流行病學研究中，由于定義和診斷方法的不同，納入對象的性別和年齡也有所不同，ACO的患病率介于15％～55％之間。ACO的患病率隨著年齡的增長而增加，在哮喘和COPD患者中，50歲以下的患病率<10％，而80歲以上患病率> 50％。

ACO的臨床表現與哮喘和COPD相似，主要癥狀為慢性咳嗽、喘息和活動后氣促。除此之外，ACO患者比單純COPD患者更易患有其他合并癥，例如過敏性鼻炎、焦慮、胃食管返流疾病和骨質疏松癥等，患心血管疾病的風險也更高。目前關于ACO的發病機制仍存在爭議，其潛在發病機制可能與兩種提出已久的假設有關。一種是"荷蘭假說"，認為哮喘和COPD是同一疾病過程的兩種不同疾病實體。

GINA雖未給出明確的ACO診斷標準，但對于哮喘、COPD和ACO的鑒別和診斷提出了一個包含五個步驟的診斷方法。第一步：確定患者是否患有慢性氣道疾病；第二步：確定患者是否符合哮喘、COPD和ACO的初步臨床診斷；第三步：肺功能檢測；第四步：開始初始治療；第五步：轉診進行性檢查。同臨床表現；另一種是"英國假說"，認為哮喘和COPD是發病機制不同的兩種不同疾病實體。

1、造模因素信息

OVA：Sigma

Al2(SO4)3﹒18H2O：上海美化化工股份有限公司。

NaOH：北京化工廠。

LPS：Sigma公司產品

大前門香煙：上海煙草集團有限責任公司。

2、實驗動物背景信息

Balb/C小鼠，雄性，SPF級，16-18g。

3、研究背景

目前ACO動物模型尚未完全建立，治療藥物評估仍在起步階段。因此，本研究旨在建立符合疾病臨床特征的ACO小鼠模型，這項工作在未來將有助于對ACO的進一步研究和臨床治療。