大鼠心肌缺血/再灌注模型

心臟結扎后左心室顏色變得蒼白，再灌注后松幾秒內可恢復紅色。心肌酶檢測肌鈣蛋白、肌紅蛋白、CKMB升高。24小時后心肌梗死病灶明顯。28天后心室重構，心功能減弱，心室纖維化病變。

實驗中涉及動物的操作程序已經得到中國醫學科學院醫學實驗動物研究所實驗動物使用與管理委員會的批準(ILAS-GC-2012-001)。

再灌注24小時后，假手術組沒有心肌梗死，而手術組出現白色的梗死灶。再灌注28天后假手術組沒有出現纖維化，手術組出現大量纖維化。手術造模后6-8周，心臟超聲檢測心功能顯著降低，證明心肌病的發生。

1）大鼠稱重后，使用2%戊巴比妥（用生理鹽水配置），根據體重戊巴比妥鈉麻醉，劑量50mg/Kg，。根據大鼠四肢肌張力確定麻醉良好后，仰位固定大鼠于手術臺上，頸前區及心前區剃毛。2）頸前區消毒，剪開頸部正中皮膚，分離組織，沿氣管方向進行氣管插管，氣管導管接呼吸機，參數設置：潮氣量 2ml/100g體重，頻率55-60次/min，吸呼比 1：1.3）心前區消毒，于胸骨左緣第四肋水平剪開長約2cm的水平切口，鈍性分離皮膚與肌肉，于胸骨左緣第 4 肋間隙開胸，剝開心包，暴露心臟，在肺動脈圓錐與左心耳之間，隱約可見心肌層下面細小、透亮、粉紅左主冠狀動脈前降支。4）無創小圓針5-0絲線在左心耳下緣前降支左側進針，進針深度控制在 1mm，寬度為3mm 左右，器械打一活結，造成暫時心肌缺血，45min 后松開絲線恢復冠脈血流。假手術組左主冠狀動脈僅穿線不結扎。5）通過肉眼觀察結扎前后左室前壁的局部顏色變化，判斷模型是否成功。結扎成功時，可見受累左室局部瞬間蒼白，隨即發紺、腫脹以及收縮力下降，成功再灌注時數秒內左室局部迅速充血，缺血心肌顏色由暗紅變為鮮紅。6）依次縫合關閉肋間隙，肌肉，以及皮膚，酒精消毒皮膚。觀察大鼠直至蘇醒。

高血壓是由多基因、多環境因素及個人不良習慣相互作用而導致的一種慢性復雜疾病，也是危害人類健康的主要疾病之一。鹽是高血壓的重要環境因素，個體對鹽負荷或限鹽呈現不同的血壓反應，因此存在鹽敏感性問題[1]。鹽敏感性是高血壓、心腦血管病和其它疾病（如哮喘、胃癌和腎功能不全等）發病及致死的一個潛在危險因素 [2]。因此在高血壓臨床診治過程中，考慮鹽敏感性將有利于對高血壓分類、危險分級以及對癥治療。

鹽敏感性通常涉及人口、種族、社會因素以及腎功能、激素水平和飲食習慣等[3]。不同種族和人群鹽敏感性個體的檢出率不同，而且血壓的鹽敏感性隨年齡增長而變化，特別是高血壓患者。鹽敏感性由Weinberger ADDIN EN.CITE[4]給出定義：靜脈滴注2L生理鹽水，測量平均動脈壓（MAP），次日早晨給予低鈉飲食后再測量MAP，兩次MAP相差≥10mmHg為鹽敏感性，否則為鹽耐受性。Yatabe ADDIN EN.CITE ADDIN EN.CITE.DATA [5]定義鹽敏感指數（SSI）為低鹽和高鹽飲食后MAP的差值與低鹽飲食MAP的商，若SSI≥5%為鹽敏感性。

高鹽攝入引起血壓升高主要有兩方面原因：一方面是腎小管對Na+ 重吸收增加，導致水鈉潴留，血漿容量增加，從而血壓升高；另一方面是內源性哇巴因物質分泌增多，特異性抑制鈉泵，胞內鈉離子濃度增加，Na+/Ca2+交換體被激活，細胞內Ca2+ 濃度升高，最終導致血管平滑肌或心肌收縮，引起高血壓[6]，可見鈉水調節紊亂是鹽敏感性高血壓發病的主要誘因。有研究表明，胃腸道在維持機體鈉水平衡方面具有重要的作用。人體胃腸道每天大約吸收7～9升液體，這一吸收過程主要是由鈉依賴的營養物質同向轉運體和鈉離子轉運體共同介導。在基礎狀態和進食后，小腸內鈉吸收主要是通過鈉氫交換體（NHE）。在小腸細胞的頂膜上，將腸腔內的鈉轉運至小腸細胞的電中性鈉氫交換體主要有NHE2、NHE3和NHE8，在結腸中主要的電中性鈉吸收通道為ENaC。在這些鈉吸收通道中NHE3是非常重要的一個鈉離子吸收通道。但小腸NHE3的特異性作用還不清楚。DR. Rieg構建了小腸特異NHE3敲除小鼠VillinCre, 并發現該小鼠成年率為0，均為出生后幾天死亡，證實腸道中NHE3調節鈉水平衡至關重要。

基于腸道NHE3對于機體鈉水平衡的調節作用，相關領域已經開展了NHE3抑制劑藥物用于高血壓治療的研究，但是NHE3抑制劑都存在明顯的副作用，大鼠及人體實驗證實NHE3抑制劑藥物能夠引發中度或重度腹瀉。已有測序研究發現NHE3編碼基因SLC9A3與先天性鈉腹瀉（CSD）密切相關，SLC9A3 基因N端鈉離子轉運結構域發生突變，能夠引發NHE3功能缺失，從而誘導CSD發生。提示直接抑制NHE3的藥物雖然能夠顯著降低血壓及鈉離子重吸收，但無法解決對機體的副作用。因此，我們研究通過其它通路間接抑制NHE3功能來降低血壓。最新研究發現，胃泌素不僅能夠調節胃酸分泌，還對機體內腎臟鈉氫交換體3（NHE3）等離子泵具有重要的調節作用。同時，我們實驗室先前的研究結果也表明，胃泌素能夠通過抑制NHE3活性參與機體鈉水代謝和血壓調節，從而改善鹽敏感性高血壓大鼠的血壓狀況。由于小腸中存在大量的胃泌素受體，因此我們采用基因工程的方法，敲除小腸道CCKBR基因以抑制胃泌素對NHE3活性的調節作用，從而造成胃腸道鈉水平衡的失調，誘導小鼠鹽敏感性高血壓模型。