Bmp5短耳小鼠動物模型

該模型通過埋植雌激素，進而建立了皮膚型狼瘡動物模型，主要是檢測其dsDNA，腎臟變化，結合皮膚癥狀變化，來確定狼瘡皮膚病模型的建立。目前國際上尚欠缺類似模型，創新點在于該模型可快速建立模型，屬于誘導性狼瘡皮膚病模型，為研究狼瘡皮膚病發病機制提供了工具。目前國際無報道。

無安全性問題。

1.Bmp5短耳（se）小鼠外耳表型

Bmp5純合型短耳小鼠發現耳廓結構都非常短小，發育明顯較其正常同胞小，失去正常小鼠耳廓亞結構形態，小鼠外耳發育的差異在2周齡時隨著發育更加明顯。

2. Bmp5短耳（se）小鼠骨骼阿利新藍染色方法

選取發育到40d的短耳小鼠和正常小鼠各3只剝皮處理，放入75%乙醇固定2周，然后放入阿利新藍工作液中進行軟骨染色2 d（根據樣品大小調整染色時間），再放入茜素紅工作液中染色1d，放入1.5%雙氧水溶液中進行漂白（肉眼可見色素去除為標準），脫色后依次放入20%、40%、60%、80%的甘油進行梯度透明各2周，最后放入100％純甘油中進行保存。

A:小鼠全身骨骼染色，左側為畸形小鼠，右側為同胞正常小鼠； B: 局部胸廓及肋骨染色，左為畸形小鼠，右為同胞正常小鼠

可見Bmp5短耳（se）純合型突變畸形小鼠的體形較正常野生型較小，特別是胸骨和肋骨的發育可見明顯的異常，Bmp5短耳（se）純合型突變畸形小鼠胸骨劍突較正常短小，發育不良，肋骨較細短，胸廓整體發育較正常差，小鼠尾骨發育也較細短。

Bmp5短耳小鼠動物模型(B6.Cg-Bmp5se)

1. Bmp5短耳小鼠繁殖

用同窩的雄性和雌性交配獲得雜合小鼠，得到后代沒有產生突變的小鼠，這些小鼠也未發現外耳短小畸形，將雜合小鼠互相再雜交，根據實驗需要陸續獲得Bmp5短耳小鼠孕鼠，這些孕鼠可以檢測出純合型、雜合型和野生型胎鼠。該純合型小鼠是可以生育的，但是純合型相互交配會得到只有純合型的后代，最好的繁殖策略還是雜合小鼠互相雜交。

2. Bmp5短耳小鼠的基因點突變檢測

DNA測序：設計引物進行Sanger法測序，應用試劑盒法裂解鼠尾提取DNA洗脫出的DNA于-20℃保存。通過引物3在線平臺(http://primer3.ut.ee/)設計候選變異引物，引物序列如下：Bmp5正向引物為GGAGGCATTACAAAGAGTTTCG，反向引物為GAACCATTTCACCAGCTCCT。聚合酶鏈式反應(PCR)反應體系：金牌Mix(green)27μl，正向引物1μl，反向引物1μl，模板DNA 1μl，擴增產物由擎科生物技術有限公司進行測序。

Bmp5短耳小鼠野生型（上）、雜合型（中）和純合型（下）的測序峰圖，Bmp5點突變位置在外顯子2倒數第7個堿基，堿基由C突變為T。

小耳畸形的病因目前還不完全明確，環境和遺傳因素是目前小耳畸形病因研究的重點。先天性小耳畸形在基因突變致病性研究方面還沒有闡明小耳畸形胚胎發育的機制。小耳畸形主要涉及胚胎發育期間第一和第二鰓弓的異常，主要表型涉及外耳發育異常。外耳的耳廓是由第一和第二鰓弓的逐漸融合形成的，在發育過程中第一和第二鰓弓之間是相互作用，兩弓之間的凹槽加深，形成外耳道，從胚胎的起源來分析，外耳的發育至少在一定程度上是由第一和第二鰓弓通過后腦的部分區域來介導的，后腦是鰓弓的神經嵴細胞的來源，在后腦的第四段基因突變可以導致外耳的發育缺陷。

小耳畸形主要是指外耳的先天發育性結構異常，其嚴重程度主要表現為從輕度結構異常到完全性耳廓缺失，并且可伴有外耳道狹窄和外耳道閉鎖等一系列先天性外耳異常，輕者耳廓略小于正常， 畸形嚴重者耳廓全部消失， 絕大多數患者僅遺留花生狀或貝殼狀的殘耳組織。同時一些小耳畸形患者也常合并顱面部畸形，中耳及半側顏面骨及軟組織發育不良等。

Bmp5短耳小鼠基因突變屬于自發性突變，也可以說是自發性點突變，位于第9號染色體，Bmp5點突變位置在外顯子2倒數第7個堿基，堿基由C突變為T，在氨基酸208處產生一個終止密碼子，終止密碼子的產生使肽鏈的正常合成發生終止，該突變的產生可能會影響Bmp5 蛋白質功能，進一步影響蛋白網絡信號的傳導。